二惡英檢測(cè)試劑盒

PN530037

注意：在使用前請(qǐng)認(rèn)真閱讀說(shuō)明書（請(qǐng)以英文為準(zhǔn)，中文僅供參考）

1、概述

二惡英檢測(cè)試劑盒利用競(jìng)爭(zhēng)性酶聯(lián)免疫原理。適用于定量或定性檢測(cè)水樣、土壤、泥沙或魚蝦產(chǎn)品中二惡英的含量。其他樣品的提取步驟請(qǐng)與我公司聯(lián)系。如果有必要陽(yáng)性樣品可以通過(guò)HPLC, GC/MS或其他的傳統(tǒng)方法證實(shí)測(cè)定結(jié)果。

2、安全說(shuō)明

底物中含有四甲基聯(lián)苯胺。終止液也含有稀硫酸。要避免皮膚和粘膜與終止液接觸。如果不小心接觸了請(qǐng)用大量的水沖洗。

3、儲(chǔ)存和穩(wěn)定性

二惡英檢測(cè)試劑盒應(yīng)該保存在4–8°C。在使用之前試劑盒中的試劑要恢復(fù)到室溫。試劑盒在有效期內(nèi)可以使用。

4、原理

ABRaxis二惡英檢測(cè)試劑盒的原理是間接接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫反應(yīng)。通過(guò)特異性抗體來(lái)識(shí)別二惡英。樣品中二惡英和包被在板底部的二惡英類似物同時(shí)競(jìng)爭(zhēng)性跟二惡英抗體結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合。洗板，加入酶標(biāo)記二抗，與結(jié)合在底部的抗原抗體復(fù)合物結(jié)合。洗板，加入底物顯色劑發(fā)生顯色反應(yīng)；樣品中的二惡英濃度與顯現(xiàn)出的藍(lán)色的深度成反比。加入反應(yīng)終止液終止反應(yīng)。在450nm波長(zhǎng)進(jìn)行檢測(cè)，通過(guò)做標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算每個(gè)樣品中二惡英的含量。

5、二惡英檢測(cè)試劑盒的限制和可能的干擾

樣品中的很多易出現(xiàn)的有機(jī)物和無(wú)機(jī)物已經(jīng)被檢測(cè)表明對(duì)試劑盒的檢測(cè)沒有干擾。然而由于樣品中化合物的多變性引起的基質(zhì)效應(yīng)是不可能完全避免的。在使用的過(guò)程中出現(xiàn)失誤也會(huì)影響結(jié)果，比如：試劑盒保存條件不對(duì)、錯(cuò)誤的加液順序、試劑的量沒有加準(zhǔn)確、孵育的時(shí)間太長(zhǎng)或太短、孵育的溫度太高或太低（低于10°C或高于30°C）。和其它檢測(cè)方法一樣對(duì)陽(yáng)性結(jié)果要求通過(guò)其它傳統(tǒng)的方法來(lái)驗(yàn)證。

6、二惡英檢測(cè)的重要性

多氯二苯并-對(duì)-二惡英polychlorinated dibenzo-p-dioxin簡(jiǎn)稱PCDDs）和多氯二苯并呋喃polychlorinated dibenzofuran（簡(jiǎn)稱PCDFs）作為環(huán)境污染物威脅人類的健康。這種污染物是高毒性的，能導(dǎo)致人類肝臟損害，影響生殖系統(tǒng)和發(fā)育。二惡英有75種異構(gòu)體多氯代二苯 (PCDD)和 135種異構(gòu)體多氯二苯并呋喃 (PCDF)，其中2,3,7,8-四氯代二苯-并-對(duì)二惡英（2,3,7,8-TCDD）是迄今為止人類已知的毒性最強(qiáng)的污染物，國(guó)際上常把各同類物折算成相當(dāng)于2,3,7,8-TCDD的量來(lái)表示，稱為毒性當(dāng)量（Toxic Equivalent Quangtity，簡(jiǎn)稱TEQ）。為此引入毒性當(dāng)量因子（Toxic Equivalency Factor，簡(jiǎn)稱TEF）的概念，即將某PCDDs/PCDFs的毒性與2,3,7,8-TCDD的毒性相比得到的系數(shù)。二惡英的檢測(cè)作為衡量環(huán)境污染的指標(biāo)是很重要的。檢測(cè)這些大分子混合物是很復(fù)雜且昂貴的事情，需要花費(fèi)大量的時(shí)間，昂貴的儀器和復(fù)雜的凈化裝置，氣象色譜是首選檢測(cè)方法，但是檢測(cè)樣品較少，成本很高。ABR二惡英ELISA檢測(cè)方法提供了簡(jiǎn)單高效低成本的檢測(cè)方法。

工作指導(dǎo)

A 試劑盒組成

1、96孔酶標(biāo)板：包被有二惡英類似物，1塊（12條×8孔）。

2、二惡英標(biāo)準(zhǔn)品:6瓶，濃度分別為0, 2.5, 5, 10, 25和50ppt

3、二惡英抗體

4、二惡英酶標(biāo)記二抗

5、5×濃縮洗液

6、底物顯色液（TMB）

7、終止液

8、稀釋液：50%二甲基亞砜水溶液，0.01% Triton X-100(用于調(diào)節(jié)樣品稀釋倍數(shù))

B、檢測(cè)準(zhǔn)備

微量移液器和吸頭是必須使用的，推薦使用排槍來(lái)添加結(jié)合物、抗體、底物和終止液，這樣可以保證整個(gè)酶標(biāo)板的孵育時(shí)間一致。在做同一次測(cè)試時(shí)要使用同一個(gè)盒子里的試劑和標(biāo)準(zhǔn)。

1、使用前將所有的試劑拿到室溫（19℃-25℃）。

2、從鋁箔袋中拿出要求數(shù)量的微孔條，放入干燥劑并重新封好袋子以免微孔條受潮。置于4-8℃保存。

3、標(biāo)準(zhǔn)液，抗體，底物，終止液不用稀釋直接使用。

4、以1：5的比例稀釋洗液（如果要使用一整瓶那么100ml洗液+ 400ml蒸餾水或無(wú)離子水）。

5、由于終止液中包含酸，拿的時(shí)候要小心。

C、檢測(cè)步驟

使用前將試劑盒和樣品處理物提前從冰箱中拿出來(lái)使其達(dá)到室溫。從鋁箔袋中拿出要求數(shù)量的微孔條，放入干燥劑并重新封好袋子以免微孔條受潮。

1、在對(duì)應(yīng)的玻璃管中加入125μL標(biāo)準(zhǔn)和樣品。在每個(gè)玻璃管都加入125 μL二惡英抗體溶液?；靹?，室溫放置60min。

2、在對(duì)應(yīng)測(cè)試孔加入100 μL混合物（步驟1），用膠帶蓋上，通過(guò)移動(dòng)酶標(biāo)板來(lái)混合液體。在室溫下孵育60分鐘。

3、孵育完成后，將微孔中的溶液倒入水槽中，用1X 洗液加滿微孔然后倒掉，拍板，去掉殘留的洗液，重復(fù)三次，總共四次洗板。

4、每個(gè)測(cè)試孔加入100μL二惡英酶標(biāo)記二抗，用膠帶蓋上，通過(guò)移動(dòng)酶標(biāo)板來(lái)混合液體。在室溫下孵育30分鐘。

5、孵育完成后，將微孔中的溶液倒入水槽中，用1X 洗液加滿微孔然后倒掉，拍板，去掉殘留的洗液，重復(fù)三次，總共四次洗板。

6、每個(gè)測(cè)試孔加入100μL底物顯色液。通過(guò)移動(dòng)酶標(biāo)板來(lái)混合液體，混合30秒。在室溫下孵育20min，避免陽(yáng)光直射。

7、每個(gè)測(cè)試孔加入100μL終止液。

8、在加入終止液15分鐘內(nèi)，450nm 下讀取每個(gè)孔的吸光度值（OD）。

D. 結(jié)果分析

可以利用商業(yè)ELISA軟件程序比如Logit/Log or 4-Parameter 來(lái)評(píng)價(jià)ELISA結(jié)果。也可以通過(guò)計(jì)算每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的%B/B0值，以%B/B0為y軸、二惡英濃度為x軸作一標(biāo)準(zhǔn)曲線。樣品濃度可以通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線來(lái)計(jì)算。當(dāng)樣品中二惡英的濃度小于2.5ppt 時(shí)即為陰性樣品。當(dāng)樣品中二惡英的濃度大于50ppt 時(shí)要稀釋后再測(cè)定。